Диагностика генитального герпеса

ВПГ-1 ВПГ-2 антителаИммунофлюоресценция - антитела ВПГ-1 и ВПГ-2

Зачем нужна лабораторная диагностика, её роль в постановке диагноза.

Чтобы установить точный и полный диагноз необходимо учитывать особенности клинического развития болезни и использовать комплекс адекватных методов обследования. В каждом конкретном случае недопустимо устанавливать диагноз «генитальный герпес» только при визуальном осмотре и наличии везикул (мелких кожных пузырьков, содержащих жидкость). Подобные эрозивно-язвенные высыпания могут быть обусловлены и другими возбудителями (стрептококковой, стафилококковой, микотической, папилломавирусной инфекцией) а также наблюдаться при сифилисе, трихомониазе, аллергических реакциях и некоторых дерматозах. Более того, визуальная диагностика невозможна при глубоком поражении тканей и органов, при бессимптомном развитии заболевания. 

Вирус простого герпеса (ВПГ) является одним из немногих вирусов, для выявления этиологической роли которого при инфекционных заболеваниях используются все лабораторные диагностические реакции – от цитологических исследований до молекулярно-биологических методов верификации. Одновременно необходимо проводить обследование на наличие сопутствующих возбудителей (хламидий, микоплазм, уреаплазм, простейших и других бактерий, вирусов). 

Что исследуется - биологический материал из очага инфекции

Для постановки диагноза генитального герпеса (ГГ) необходимо исследовать материал, полученный непосредственно из полового тракта, а также биологические жидкости и секреты организма. 

Для выделения вируса герпеса с целью диагностики герпетического заболевания используются: 
содержимое герпетических пузырьков, кровь, слюна, спинномозговая жидкость, биоптаты шейки матки и других органов, цервикальный секрет, уретральные пробы, эякулят, секрет предстательной железы, соскобы и смывы с тканей и органов, моча, слизь, мазки-отпечатки с высыпаний и т.д 

Что ищут в процессе исследования 

Лабораторная диагностика заболеваний, вызванных ВПГ включает комплекс методологических подходов, цель которых состоит в обнаружении маркеров герпесвирусной инфекции, среди которых: 
  • геном вируса
  • вирусные белки (антигены)
  • инфекционные вирусные частицы
  • цитопатогенное действие на клетки
  • специфический иммунный ответ организма больного (его антитела)

Методы лабораторной диагностики

До недавнего времени лабораторная диагностика герпесвирусных инфекций (ГВИ) производилась только в специализированных вирусологических центрах. Появление новых методов исследования привело к расширению возможностей вирусологической диагностики ГВИ в практическом здравоохранении. 

Современные методы лабораторной диагностики ГВИ позволяют: получать результаты анализа в короткие сроки (часы, иногда — минуты), проводить и завершать анализ без выделения культуры вируса, используя только нативный материал; получать надлежащую достоверность анализа, учитывая высокую специфичность и чувствительность методов исследования.

В практической деятельности наиболее доступными методами диагностики являются: 
  • молекулярно-биологические – детекция вирусного генома методом полимеразной цепной реакции (ПЦР); 
  • иммуноморфологические – выявление антигена ВПГ с помощью прямой и непрямой иммунофлюоресценции (ПИФ и НИФ); 
  • серологические – выявление специфических антител к ВПГ (IgA, IgM, IgG) и антигена методом иммуноферментного анализа (ИФА);
  • вирусологические – выделение вируса в культуре ткани из клинического материала и его идентификация; 
  • цитологические

Молекулярно-биологические методы диагностики

К молекулярно-биологическим методам относится один из самых перспективных современных методов лабораторной диагностики – метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Метод ПЦР, позволяет обнаружить единичные копии вирусной ДНК в клетках, биологических жидкостях (кровь, слюна, материал, взятый из уретры или цервикального канала) и биопсированных тканях.

Иммуноморфологические методы

Обнаружение вирусного антигена в клетках и жидкостях организма (клетках осадка мочи, слюны, лейкоцитах крови, мазков-отпечатков с герпетических высыпаний, шейки матки, биопсийного и аутопсийного материала) осуществляют с помощью метода иммунофлюоресценции, иммунопероксидазного и лантанидного методов. 

В прямой монофлюоресценции используют антитела, меченные люминесцирующей сывороткой (изотиоционатом флюоресцеина), что позволяет выявить вирусный антиген по свечению клеток в люминесцентном микроскопе. Во втором случае применяют антитела, меченные пероксидазой. Вирусный антиген выявляют в обычном световом микроскопе по окрашиванию антигенсодержащих клеток хромогеном в темно-коричневый цвет. Разрабатываются также лантанидные методы, основанные на амплификации свечения.

Непосредственное выявление антигена в клиническом образце указывает на активную репликацию вируса и является методом, конкурирующим по надежности с методом выделения вируса в культуре тканей. 

Серологические методы

Обнаружение в крови антител к ВПГ-2 не позволяет достоверно судить о наличии у больного ГГ, так как многие используемые коммерческие серологические наборы не способны точно различать антитела к ВПГ-1 и ВПГ-2 из-за высокого (70%) антигенного сродства обоих типов вируса. 

Чувствительность большинства известных ИФА тест-систем для выявления ВПГ-инфекции варьируется в пределах 48–98,7% и зависит от исследуемого материала. Наличие перекрестных антигенных связей между штаммами, принадлежащими к ВПГ-1 и ВПГ-2 и другими типами герпесвирусов, требует определенной осторожности при интерпретации результатов лабораторных исследований. 

В этой группе существует еще один метод – так называемый Western blot analysis: тестирование с помощью твердофазного иммунологического анализа электрофоретически разделенных белков или полипептидов. Метод высокоточен и позволяет дифференцировать антитела к ВПГ-1 и ВПГ-2. 

Окончательные тесты на определение антител к ВПГ-2 должны основываться на детекции ВПГ2-типоспецифического поверхностного антигена – гликопротеина gG1–gG2. Чувствительность и специфичность серологических тестов на его основе при исследовании крови составляют 95–99 и 100% соответственно. В настоящее время типоспецифическая серология используется преимущественно в научно-исследовательских целях и не применяется в широкой клинико-лабораторной практике.

Вирусологическое исследование

Для диагноза заболевания важное значение имеет выделение вируса из пораженных тканей. Выделение вирусов в клеточной культуре включает выявление (индикацию) вируса и последующее его серотипирование. При подозрении на герпетическую инфекцию необходимо проводить многократное вирусологическое исследование материала, отделяемого из мочеполовой системы у пациентов, т.к. отрицательный результат однократного вирусологического исследования не исключает наличие урогенитальной герпетической инфекции. Повторное 2–4-кратное исследование (1 раз в неделю) повышает шанс выделения вируса в 2–3 раза.

Цитологическое исследование

Наиболее доступным, быстрым и дешевым методом исследования является цитологическое исследование инфицированного материала на ВПГ. Материалом для цитологического исследования может служить содержимое везикул, соскоб со дна эрозии, слизистой уретры, стенок влагалища, канала шейки матки. 

антитела к ВПГ-2 Антитела к ВПГ-2. Подготовленный лабораторный препарат (ткань, зараженная ВПГ-2) 
Специальным образом подготовленные образцы исследуют с помощью световой микроскопии. При цитологическом исследовании обнаруживаются многоядерные гигантские клетки с внутриядерными включениями.

Недостатками метода являются низкая чувствительность, сложность дифференциальной диагностики с другими вирусными инфекциями и зависимость от квалификации специалиста, проводящего исследование. Однако этот метод может быть применен как вспомогательное диагностическое средство. Электронная микроскопия в диагностике герпетической инфекции также рекомендована для экспресс-диагностики ВПГ-инфекции.

Выявление противовирусных антител классов M и G

Для подтверждения инфицирования вирусом герпеса определяют уровни специфических иммуноглобулинов Ig, относящихся к различным классам G и M (IgM, IgG), циркулирующих в биологических жидкостях и секретах организма больного (сыворотке крови, ликворе, слюне, слезной жидкости). Выявление специфических противогерпетических антител (IgM, IgG,) чаще всего осуществляют методом иммуноферментного анализа (ИФА). Редко используют классические методы: реакцию нейтрализации, реакцию связывания комплемента вируса герпеса (РСК). Из новых методов следует отметить иммуноблот (western blot) и иммунодот.

Детекция типоспецифических антител позволяет определить наличие и тип герпетической инфекции по наличию М-антител, нарастанию G-антител к одному или двум вирусам. Достоверные результаты получают при исследовании парных сывороток крови больного, взятых в начале заболевания (3-7 день) и через 10-12 дней. В этом случае удается наблюдать динамику нарастания антител. При вирусных инфекциях лишь четырехкратное и большее повышение титра антител во второй сыворотке имеет диагностическое значение.

IgM детектируются через неделю после заражения. Специфические IgG антитела обычно появляются через 2-3 недели после первичного инфицирования.

Выявление специфических иммуноглобулинов IgM в отсутствии IgG или при 4-кратном увеличении титров специфических IgG в парных сыворотках крови, полученных от больного с интервалом 10-12 дней, свидетельствует о первичном заражении.

Выявление специфических иммуноглобулинов IgM на фоне IgG при отсутствии достоверного роста титров IgG в парных сыворотках говорит об обострении хронической герпетической инфекции.

Выявление титров IgG выше средних является показанием к дополнительному обследованию пациента и выявлению выделения вируса герпеса в средах.

Итоговый вывод

Таким образом, анализ методов, позволяющих подтвердить клинический диагноз «генитальный герпес», свидетельствует о разнообразии подходов к детекции вируса простого герпеса с учетом различных локализаций, манифестных и бессимптомных (наиболее проблематичных) стадий заболевания. Следует подчеркнуть, что ни один из методов лабораторной диагностики не обладает 100%-ной чувствительностью и специфичностью. Повышение достоверности лабораторной диагностики за счет исключения ложноотрицательных и ложноположительных результатов достигается путем одновременного применения нескольких методов тестирования, базирующихся на разных принципах.

Читайте также:
запись по телефону 8 (495) 970-30-92  ежедневно с 7.00 до 23.00
В СВЯЗИ С ЭПИДЕМИЕЙ, ПРИЕМ ТОЛЬКО ПО ЗАПИСИ! ЗВОНИТЕ!

Медицинский центр  "На Ленинском" - ежедневно.
Адрес: г. Москва, Ленинский проспект, дом 82/2
Часы работы: Пн - Пт: с 10.00 до 20.00; Сб - Вс, праздники: с 11.00 до 18.00
Как нас найти (схема проезда):
от ст.м. «Университет» - пешком до ул. Крупской, дом 2 (10 мин.)
от ст.м. «Новые Черемушки» - автобус № 1, 113, маршрутка № 550 до ост. «ул. Крупской» ( 5 мин.)
от ст.м. «Октябрьская» (кольцевая), выход на Ленинский пр-т - троллейбус м4 и автобус м1; маршрутка № 62, 553 до ост. «ул. Крупской» (10 мин.)
от ст.м. Юго-Западная - троллейбус № 62; 84 (10 мин). 

Медицинский центр "На Самотечной" - cуббота, воскресенье.
Прием по предварительной записи!